稀释法测定最小抑菌浓度（MIC）

尊龙凯时的稀释法测定最小抑菌浓度（MIC）是一种用于评估抗菌剂抑制微生物生长能力的实验技术。这种方法主要包括微量稀释法和常量肉汤稀释法。琼脂稀释法因其操作简便、成本低廉及适合高通量筛选等优点，特别适合实现自动化操作和精确控制药物浓度。而肉汤稀释法则更直观、易于操作，适合实验室规模的测试，并能够根据实际需求调整药物浓度和培养基体积。

琼脂稀释法

尊龙凯时使用琼脂稀释法测定最小抑菌浓度的原理是将不同浓度的抑菌剂溶解于琼脂培养基中，通过点种细菌来观察生长情况，从而确定抗菌物质抑制受试菌生长的最低浓度，即最小抑菌浓度（MIC）。此方法适用于不溶性抗菌产品。

操作步骤

1. 抗菌溶液配制：以无菌操作取5ml或5g（固体研磨后）样品，放入45ml灭菌磷酸缓冲液中，充分震荡溶解，配成10%的均匀分散溶液或悬液。
2. 含抗菌剂培养基配制：将已配成10%的抗菌溶液用PBS进行对倍系列稀释，置于45℃至50℃水浴恒温备用。
3. 双倍浓度培养基配制：取76g MH琼脂培养基，溶于1000ml水中并加热至沸腾，121℃压力蒸汽灭菌15分钟，置于45℃至50℃水浴备用。
4. 配制含抗菌液的培养基：将10ml系列稀释的抗菌液与双倍MH琼脂培养基混合，待凝固后备用。
5. 用加样器取1μl至2μl的菌悬液点种于平皿，接种后形成的菌液圈直径约为5mm至8mm。
6. 以同样方法接种不含抗菌成分的MH琼脂平板作为阳性对照。
7. 将接种后的平板放置于35℃培养箱中，倒置培养18小时至24小时，观察结果。

营养肉汤稀释法

尊龙凯时还使用营养肉汤稀释法来测定最小抑菌浓度。该方法将不同浓度的抑菌剂溶解于营养肉汤培养基中，接种细菌后通过观察细菌的生长情况确定MIC。此方法适用于可溶性抑菌产品。

操作步骤

1. 按2112所示方法制备金黄色葡萄球菌和大肠杆菌悬液。
2. 含抗菌剂的培养基配制：将抗菌溶液用蒸馏水稀释成不同浓度的受试液，加入25ml双倍浓度的营养肉汤试管中。
3. 取0.1ml含菌量约为108 cfu/ml的菌悬液，接种至含抗菌剂的营养肉汤中，作为实验组样本。
4. 以同样方法接种不含抗菌剂的营养肉汤，作为阳性对照组样本。
5. 取2支含营养肉汤的试管，作为阴性对照组样本。
6. 将实验组样本、阳性对照组样本及阴性对照组样本放置于37℃培养箱中，培养48小时，观察结果。
7. 应当对试验中用的菌悬液进行活菌计数，浓度应为5×10^5 cfu/ml至5×10^6 cfu/ml。

评判标准

尊龙凯时的评判标准是，当阳性对照管中有细菌生长（混浊），而阴性对照管中无细菌生长（透明），实验组无菌生长的最高稀释度所对应的抗菌剂浓度，被定义为该样品对受试菌的MIC。